高二生物微生物的实验室培养知识点整理

实验题一直都是高中生物考试的大题，也是难点，下面是本站小编给大家带来的高二生物微生物的实验室培养知识点整理，希望对你有帮助。

高二生物微生物的实验室培养知识点

一、配制时的质量控制

(1)容器：配制和分装培养基的烧瓶、平皿或试管等器材应为中性，无酸、碱抑制物残留，平皿底部要平，以免琼脂厚薄不一，影响药敏试验结果。

(2)成分来源：各种成分来源可靠，不含对目的菌生长有抑制的物质。特殊要求的培养基，如葡萄糖氧化发酵试验(O/F 试验)，除加入葡萄糖外，不能含有其他糖类，指示剂不能用乙醇溶液，避免O/F试验的假阳性。培养基配制用水应是蒸馏水。

(3)pH值调整：根据培养基的不同要求调整pH 值，控制在要求范围的±0.2之内。应当注意，培养基在高压灭菌后其pH 值降低0.1～0.2，故矫正时应比实际需要p H值高0.1～0.2。

(4)灭菌：根据培养基所含成分及配制数量的不同，选择不同的灭菌方式，既要达到灭菌效果，又不破坏培养基成分。一般对稳定的培养基，如MH琼脂、营养琼脂可用高压灭菌，即121℃15min ;而含糖的培养基则以108℃灭菌为好，以防止糖类破坏。不耐高热的物质如血清、牛乳等，可采用间隙灭菌法灭菌。

(5)分装：根据使用的目的和要求决定分装量。分装培养基所用的平皿、试管要求清洁，不残留酸碱;制备平板培养基时，操作台要水平，以避免琼脂平板厚薄不一，同时确保无菌操作。

二、配制后质量控制

(1)培养基外观情况：包括颜色、透明度、有无沉淀和凝固。如发现培养基表面有裂纹或与培养皿的边缘分离，说明培养基有脱水现象，必须丢弃。

(2)无菌试验：每一批配好的培养基均须进行无菌试验。先灭菌后分装的培养基，可采用抽样方法试验，少于100个样本通常选取5%～10%的量，如果配制大量培养基，则任意选取10 个培养基;无菌分装培养基则需全部做无菌试验。样本在35 ℃ 或其他适宜的温度下隔夜培养，如培养基含有血液，则需再置于室温1天，以检查嗜冷菌。选择性培养基因含有抑制物质，能抑制许多微生物，因此，可加入10倍量的无菌液体培养基，稀释抑制物质，以利于检出污染菌。即使做过无菌试验，接种时，也要检查每个平板上的可见菌落。

(3)性能测试：每一批新制或新购的培养基，使用前均须取已知性质的库存菌种进行性能测试。培养基按目的不同可分为增菌培养基、分离培养基和鉴定培养基。

①增菌培养基：接种少量难以生长的细菌，在一定时间内观察增菌情况，细菌能生长的最小接种浓度越小，说明增菌培养基性能愈好。

②分离培养基：要求目的菌生长良好，非目的菌被抑制。一般要求生长的目的菌接种量不可过多，较好的方法是将测试菌调成0.5麦氏浊度的菌悬液，再用0.001ml的标准接种环涂划在培养基上，观察菌落生长。

③鉴定培养基：应选择具有典型特征的菌株作性能试验。如三糖铁琼脂，须用弗劳地枸橼酸杆菌、福氏志贺菌及铜绿假单胞菌3种菌分别接种3支培养基，若反应结果为斜面产酸/高层产酸、硫化氢阳性，斜面产碱/高层产酸，斜面产碱/高层产碱，质量才算合格。

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